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美國(guó)**BTX是專(zhuān)業(yè)的細(xì)胞融合、多功能細(xì)胞電穿孔儀 的生產(chǎn)廠家。自從1983年起,苛求的科研工作者就已經(jīng)把BTX多功能細(xì)胞電穿孔儀作為電融合、電穿孔等應(yīng)用領(lǐng)域的**儀器。ECM多功能細(xì)胞電穿孔儀在轉(zhuǎn)基因的應(yīng)用領(lǐng)域中得以廣泛的應(yīng)用,其無(wú)以倫比的高性能得到了全球同行的厚愛(ài)。BTX的多功能細(xì)胞電穿孔儀系列產(chǎn)品適用于動(dòng)植物、細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物、人類(lèi)細(xì)胞(包括活體細(xì)胞)的轉(zhuǎn)基因等操作,
BTX還在網(wǎng)站建立了技術(shù)數(shù)據(jù)庫(kù),提供超過(guò)5000份的參考目錄和600多份的protocols供科研工作者免費(fèi)查閱。
多功能細(xì)胞電穿孔儀應(yīng)用舉例
•動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染(系統(tǒng):ECM630/830)
對(duì)真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染可以通過(guò)多種方法獲得,例如磷酸鈣沉淀、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒方法以及電穿孔。電穿孔已經(jīng)被正式對(duì)傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法不靈的細(xì)胞有很好的效果,因此被選為**的分子傳遞系統(tǒng)。電穿孔的好處有可重復(fù)性、更高的效率、大量樣本處理、無(wú)毒性以及容易使用(不需要孵育時(shí)間)。
Lofin等人(1999)對(duì)NIH/3T3細(xì)胞進(jìn)行電穿孔使mRNA進(jìn)入,以研究細(xì)胞周期及細(xì)胞分化過(guò)程中mRNA對(duì)基因表達(dá)調(diào)節(jié)、控制。Bodwell等人(1999)在對(duì)COS-7細(xì)胞進(jìn)行電穿孔是使用較長(zhǎng)的脈沖時(shí)間后獲得了較高水平的表達(dá)。Warner等人(1997)使用電穿孔方法成功轉(zhuǎn)化了淋巴細(xì)胞。Incyte Genomics公司成功使用BTX電穿孔儀轉(zhuǎn)染了ES細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因小鼠的生產(chǎn)。BTX ECM399\630\830型儀器、電穿孔杯以及多種特用的電極都用于動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染用途。
•蛋白質(zhì)電整合/電插入 (系統(tǒng):ECM630/830)
將蛋白質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞以及將蛋白質(zhì)插入至細(xì)胞膜中也可以通過(guò)電穿孔來(lái)實(shí)現(xiàn)。不光肽段,而且包括抗體的多種蛋白,也可以進(jìn)行導(dǎo)入。Ushio-Fukai等人(1998)對(duì)電穿孔插入哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的外源蛋白進(jìn)行了定量。對(duì)于這些用途可以使用多種BTX電極。
•植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化(系統(tǒng):ECM630/830)
對(duì)植物原生質(zhì)(玉米、煙草等)及完整植物的電穿孔可以用于產(chǎn)生對(duì)農(nóng)業(yè)/園藝有用的轉(zhuǎn)基因作物。植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一個(gè)主要目的是對(duì)植物細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生具有優(yōu)良品質(zhì)及產(chǎn)量增加的作物。Lin等人(1997)優(yōu)化了多種植物上用于GUS表達(dá)的電穿孔條件,結(jié)果顯示完整植物細(xì)胞以及原生質(zhì)都可以進(jìn)行有效轉(zhuǎn)化。Diaz等人(1994)針對(duì)小麥及燕麥的葉和根的原生質(zhì)進(jìn)行了相似的優(yōu)化試驗(yàn),證明了電穿孔對(duì)于植物工作的有效性。這些作者也比較了電穿孔與PEG的差別,結(jié)果發(fā)現(xiàn)電穿孔更有效、更有重復(fù)性、更經(jīng)濟(jì)。BTX是世界上體內(nèi)轉(zhuǎn)染用特殊電極的**者。對(duì)于這些用途可以使用多種BTX電極,例如2針陣列、游標(biāo)尺電極、以及Tweezertrodes。
•貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染----ACT (系統(tǒng):ECM630/830)
除了對(duì)盛在普通樣品杯的懸浮細(xì)胞進(jìn)行電穿孔外,還可以對(duì)多種培養(yǎng)板上的貼壁細(xì)胞進(jìn)行原位電穿孔。這樣可以避免用胰酶消化細(xì)胞,有助于保持細(xì)胞的活性及細(xì)胞數(shù)目。Lewis等人(1999)使用培養(yǎng)皿電極將基因轉(zhuǎn)染入人類(lèi)及靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。Paptis等人(1998)通過(guò)對(duì)長(zhǎng)在導(dǎo)電載玻片的NIH/3T3細(xì)胞進(jìn)行原位電穿孔研究信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。Teruel等人(1999)也對(duì)位于載玻片上的海馬神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)入DNA、RNA以及多種大分子。BTX為貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染(ACT)提供了PP35-2、366、747、840及Epizap電極系統(tǒng)。請(qǐng)關(guān)注不久后為這些用途開(kāi)發(fā)的新產(chǎn)品
•高通量篩檢----HTS (系統(tǒng):ECM630/830)
高通量篩檢及cDNA文庫(kù)的建立,需要一次處理多個(gè)樣本的能力。使用傳統(tǒng)樣品杯花費(fèi)很大而且有時(shí)間限制。然而,96孔板里使用的電極對(duì)于這些類(lèi)型的應(yīng)用肯定有用。Hoffma-Tsay等人(1994)使用96孔共軸電極在植物融合實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)8種化學(xué)物質(zhì)。Peterfy等人(1995)比較了多種類(lèi)型的多孔電極,將DNA傳遞入COS-7細(xì)胞。Marrero等人(1997)使用多孔電極將抗體電導(dǎo)入血管平滑肌細(xì)胞,以誘導(dǎo)細(xì)胞增值。BTX目前提供747和840用于這樣的用途,并且不斷開(kāi)發(fā)新的產(chǎn)品。
體內(nèi)基因?qū)耄↖VGD)(系統(tǒng):ECM830)
在體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移的非病毒技術(shù)中,直接將質(zhì)粒DNA注射進(jìn)入肌肉內(nèi)是簡(jiǎn)單、廉價(jià)及安全的。Aihara及Miyazaki(1998)**次指出通過(guò)在肌肉內(nèi)將DNA注射與電穿孔相結(jié)合,可以將表達(dá)增強(qiáng)100倍。
Mir等人(1999)使用多種類(lèi)型的電極將基因傳遞進(jìn)入多種種屬的骨骼?。ù笫?、小鼠、兔、猴)。他們的結(jié)果顯示通過(guò)使用電穿孔以及DNA注射:(1)基因轉(zhuǎn)移的效率大大增加了,只是表達(dá)增強(qiáng)2-4倍;(2)不同實(shí)驗(yàn)之間的差別縮小了,而這正是單獨(dú)DNA注射的主要缺點(diǎn);(3)表達(dá)持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng)(數(shù)月),這對(duì)于長(zhǎng)期臨床應(yīng)用非常重要;(4)不同種屬的不同的肌肉都有陽(yáng)性的反應(yīng),說(shuō)明廣泛的可用性;(5)基因表達(dá)非常特異僅在局部,而周?chē)M織則沒(méi)有影響到。這種技術(shù)成功用于其他組織,例如肝、睪丸、以及皮膚。
*近Vicat等人(1999)通過(guò)體內(nèi)電穿孔儀將基因傳遞如小鼠腦組織。與被稱(chēng)為有力的腦組織基因轉(zhuǎn)移的非病毒載體的pCMV-luc與PolyEthylenlmine聯(lián)合的方法相比,電穿孔的效率要高50倍。Nishi等人證明使用電穿孔可以獲得有效的神經(jīng)膠質(zhì)瘤基因轉(zhuǎn)移。Nishi還顯示對(duì)實(shí)體瘤進(jìn)行電基因治療后腫瘤生長(zhǎng)阻滯了50-90%。Dean等人將基因電導(dǎo)入完整的腸系膜動(dòng)脈獲得了成功。電穿孔已經(jīng)被證實(shí)確實(shí)是進(jìn)行體基因/藥物轉(zhuǎn)移方面一項(xiàng)有前途的技術(shù),有許多新奇的用途。BTX公司特制的2針陣列電極、Genetrodes、卡鉗電極、Tweezertrodes提供將基因侵入性以及侵入性轉(zhuǎn)移入組織的方法。
卵內(nèi)基因轉(zhuǎn)移(IOGD) (系統(tǒng):ECM830)
Muramatsu等人(1997)比較了3種轉(zhuǎn)染方法用于將外源基因轉(zhuǎn)入早期雞胚進(jìn)行表達(dá)。他發(fā)現(xiàn)與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及基因槍相比,電穿孔是***的方法。Takeuchi等人(1999)使用電穿孔技術(shù)將早期雞胚轉(zhuǎn)染了tbx5及tbx4基因,以確定肢芽的翅/腿標(biāo)志。
對(duì)于這種用途已經(jīng)開(kāi)發(fā)出特用的電極。Genetrodes、L形狀針電極,被用于測(cè)定雞胚及靶向組織的特定區(qū)域。許多研究人員已經(jīng)轉(zhuǎn)染了眼、心或者肢體組織,方便了發(fā)育生物學(xué)方法的進(jìn)一步研究。剛上市的足控開(kāi)關(guān)具有遙控功能,是ECM830可以在不需要手操作的情況下進(jìn)行激活,這對(duì)于卵內(nèi)、體內(nèi)以及體外胚胎用途非常重要。
體外胚胎基因轉(zhuǎn)移(IVEGD)(系統(tǒng):ECM830)
Tasaki等人(1999)討論了使用電穿孔在體外小鼠胚胎方面的運(yùn)用。小鼠胚胎有柱狀的結(jié)構(gòu)而且有比家禽更多胚胎培養(yǎng)基操作需求。有可能對(duì)胚胎進(jìn)行電穿孔用于異位表達(dá)研究。在小鼠中后腦部的基因表達(dá)已經(jīng)被觀察。這個(gè)技術(shù)也用在交配后9.5天小鼠胚胎,以研究Hu基因在神經(jīng)分化中的功能。BTX為這些目的提供一種全新的電極:Genepaddles。
•胚胎操作/核移植/動(dòng)物克隆 (系統(tǒng):ECM2001/830)
核移植是將細(xì)胞核從供體轉(zhuǎn)入受體的過(guò)程。細(xì)胞核指導(dǎo)胚胎的發(fā)育,導(dǎo)致新生體安全出生。在這個(gè)過(guò)程中,電融合用于將供體細(xì)胞與受體卵細(xì)胞融合,并進(jìn)一步激活細(xì)胞分裂,形成胚胎。Meng等人(1997)將核移植技術(shù)擴(kuò)展至靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物模型,克隆出恒河猴。技術(shù)的進(jìn)步使研究人員能夠從分裂球進(jìn)展至更高分化的胚胎細(xì)胞以及靜止的胚兒細(xì)胞,作為核的供應(yīng)來(lái)源。胚胎產(chǎn)生的細(xì)胞在體外培養(yǎng)6-13代,然后在轉(zhuǎn)入前使用血清饑餓的方法使細(xì)胞靜止。如前文所述,Roble、Cibelli以及Stice是**次在1998年報(bào)告使用非老化胚成纖維細(xì)胞作為核的供體進(jìn)行核移植而產(chǎn)生綿羊克隆轉(zhuǎn)基因牛的人。Ian Wilmut在1996年震驚了整個(gè)世界,他從成年乳腺的細(xì)胞產(chǎn)生出**個(gè)動(dòng)物克隆——多利。使用分化的成年細(xì)胞進(jìn)行克隆的能力打開(kāi)了核移植廣泛運(yùn)用的大門(mén)即基因治療的令人激動(dòng)的模式。*近的成功事例PPL Therapeutics公司從成年體細(xì)胞克隆出豬。對(duì)于這些用途可以使用多種細(xì)胞融合樣品池及微型載玻片。
暫無(wú)數(shù)據(jù)!