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使用FLowCam研究——抗 PD-L1 單抗的質(zhì)量控制

使用FLowCam研究——抗 PD-L1 單抗的質(zhì)量控制
麥奇克/Microtrac  2020-03-13  |  閱讀:2213
PD-1/PD-L1分子是目前免疫檢查點(diǎn)領(lǐng)域倍受關(guān)注的靶點(diǎn)。截止 2017年底,美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration,F(xiàn)DA)批準(zhǔn)了3個(gè)PD-L1抗體,分別為羅氏的Atezolizumab、阿斯利康的Durvalumab和輝瑞/默沙東的Avelumab,適應(yīng)癥包括非小細(xì)胞肺癌、 尿路上皮癌以及merkel細(xì)胞癌等少見(jiàn)癌種;國(guó)內(nèi)也有10多家藥企布局了該靶點(diǎn)抗體的研發(fā)。使用流式顆粒成像分析法的FlowCam 8100可以幫助用戶對(duì)配方中的不溶性微粒進(jìn)行檢測(cè)。

FlowCam具備高靈敏度,高質(zhì)量的顆粒圖像,精確的濃度檢測(cè)和直測(cè)粒徑等性能,從一次實(shí)驗(yàn)結(jié)果中就能夠獲得“顆粒有多少”,“顆粒有多大”,“顆粒是什么”等信息。


目的:研究建立抗程序性死亡受體配體 1(programmed cell death protein ligand 1,PD-L1)單抗的質(zhì)量控制方法。

方法:利用成像毛細(xì)管等電聚焦電泳(imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis,iCIEF)、肽圖對(duì)抗 PD-L1 單抗進(jìn)行鑒別;利用還原 / 非還原十二烷基磺酸鈉毛細(xì)管電泳 (capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate,CE-SDS)、分子排阻高效液相色譜(size exclusion-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)、離子交換高效液相色譜(ion exchange-high performance liquid chromatography,IEC-HPLC)對(duì)抗 PD-L1 單抗的純度進(jìn)行控制;利用細(xì)胞結(jié)合抑制法和轉(zhuǎn)基因細(xì)胞法測(cè)定抗 PD-L1 單抗的活性;利用光阻法和液流成像分析法對(duì)不溶性微粒進(jìn)行檢測(cè)和分析。

結(jié)果:抗 PD-L1 單抗的 iCIEF 檢測(cè)結(jié)果具有特征性主峰,肽圖檢測(cè)具有相應(yīng)特征峰,起到很好的鑒別作用。還原 CE-SDS 的輕鏈與重鏈峰面積之和的百分比為(98.37±0.21)%,非還原 CE-SDS 主峰峰面積百分比為(96.33±0.15)%;SEC-HPLC 單體的峰面積百分比為(99.43±0.02)%;IEC-HPLC 酸性區(qū)峰面積百分比、主峰峰面積百分比、堿性區(qū)峰面積百分比分別為(13.63±0.40)%、(80.00±0.36)%、(6.37±0.15)%。細(xì)胞結(jié)合抑制法與轉(zhuǎn)基因細(xì)胞法的活性檢測(cè)均呈現(xiàn)劑量反應(yīng)曲線,反映抗 PD-L1 單抗劑量依賴性地阻斷程序性死亡受體 1(programmed cell death protein 1,PD-1)與 PD-L1 的結(jié)合及后續(xù)的生物學(xué)效應(yīng)。光阻法檢測(cè)≥ 10 μm 及≥ 25 μm 的不溶性微粒數(shù)分別為(1.33±0.58)粒·mL -1 和(0.00±0.00)?!L -1 ;液流成像分析法檢測(cè) 2~10 μm、≥ 10 μm及≥ 25 μm 的微粒數(shù)分別為(1 243.67±242)?!L -1 、(45.67±16.07)粒·mL -1 和(10.00±5.00)?!L -1 ,其中,蛋白聚體占 87.45%,非蛋白聚體占 12.55%。


圖 1 抗 PD-L1 單抗參比品(A)與樣品(B)的 iCIEF 代表圖譜


圖 2  抗 PD-L1 單抗參比品(A)與樣品(B)的肽圖代表圖譜



討論:研究建立了抗 PD-L1 單抗的多種質(zhì)控方法,為國(guó)內(nèi)抗 PD-L1 單抗的質(zhì)量檢測(cè)提供了參考依據(jù)。


郭莎,王開(kāi)芹等,抗 PD-L1 單抗的質(zhì)量控制研究,藥物分析雜志,2019,39(1):13-22



Fluid Imaging Technologies(FlowCam)公司成立于1999年美國(guó)緬因州斯卡伯勒市,其研發(fā)并生產(chǎn)的FlowCam系列儀器是將流式細(xì)胞法組合到數(shù)字成像顯微鏡中,基于圖像分析法的流式動(dòng)態(tài)成像顆粒分析儀,它使顆粒分析變得更快,更簡(jiǎn)單。具有革新意義的FlowCam系列儀器被廣泛應(yīng)用于研發(fā)和質(zhì)量控制,應(yīng)用涉及全球多個(gè)領(lǐng)域。

流式顆粒成像分析系統(tǒng)FlowCam?8000系列具有以下優(yōu)點(diǎn)。

1.測(cè)量粒度和顆粒形狀-對(duì)每個(gè)顆粒成像后都可以獲得30多種形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果。

2.快速提供具有統(tǒng)計(jì)意義的結(jié)果-用戶可在過(guò)程種觀察到每分鐘數(shù)以萬(wàn)計(jì)的顆粒。

3.提供卓越的成像質(zhì)量和基于成像法的測(cè)量參數(shù)-可以看到快速和準(zhǔn)確的,可由定量數(shù)據(jù)證明的檢測(cè)測(cè)量結(jié)果。

4.自動(dòng)化的,可建模的,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的 - 基于自動(dòng)識(shí)別統(tǒng)計(jì)軟件 - 可將不同的顆粒進(jìn)行分門(mén)別類(lèi),從而節(jié)省時(shí)間。


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