編號：FTJS05724
篇名：改良固相吸附法在HCV RNA實時熒光定量檢測中的應(yīng)用
作者：張寶華； 王紅； 倪二茹；
關(guān)鍵詞：納米二氧化硅； 固相吸附； 聚合酶鏈反應(yīng)；
機構(gòu)： 南京軍區(qū)福州總醫(yī)院第二住院部檢驗科； 北京總參管理保障部北極寺門診部；
摘要： 目的通過對固相吸附法的改良,探討采用固相吸附法提取血清中丙型肝炎病毒RNA在實時熒光定量檢測中的應(yīng)用。方法首先對HCV RNA的提取方法進行改良,對固相載體納米二氧化硅顆粒表面進行硅醇基化以提高其核酸吸附能力;同時對病毒裂解液進行優(yōu)化,獲得異硫氰酸胍(GuSCN)的最佳濃度用于HCV RNA的提取;最后使用改良方法提取的HCV RNA進行實時熒光定量PCR實驗,并繪制其標(biāo)準曲線,計算出線性方程,同時檢測該提取方法下實時熒光定量PCR對血清樣本中HCV RNA的最低檢測限并對其檢測重復(fù)性進行驗證。結(jié)果納米二氧化硅顆粒硅醇基化后其吸附核酸的能力顯著提高;病毒裂解液中GuSCN的最佳濃度為4.23mol/L。使用改良方法提取血清樣本中的HCV RNA用于實時熒光定量PCR,獲得標(biāo)準曲線和線性方程,其線性相關(guān)系數(shù)(R2)達到0.999,檢測的線性范圍為2.52~5.52IU/mL,或者102.52~105.52病原體數(shù)/毫升。該方法的檢測限達到(2.52±0.50)IU/mL,且其檢測重復(fù)性良好。結(jié)論改良后的固相吸附法可以大大降低實時熒光定量PCR的最低檢測限,提高了HCV的陽性檢測率。該方法操作簡單,成本低,可以廣泛應(yīng)用于臨床中HCV的檢測和其他病毒的核酸檢測。
