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貝克曼庫爾特生命科學(xué)Biomek i-series自動化工作站與SCIEX BioPhase? 8800高通量毛細管電泳在大樣本量單抗CE-SDS純度分析中的應(yīng)用——同時分析不同濃度及不同前處理方式的樣品。

CE-SDS技術(shù)在蛋白藥物研發(fā)和質(zhì)控中至關(guān)重要。藥物開發(fā)各個階段都有大量CE-SDS檢測需要。特別是隨著藥物種類的多樣化，單抗、雙抗、融合蛋白和ADC等，不同類型蛋白藥物CE-SDS檢測的樣品前處理條件也變得多樣。生物藥研發(fā)中，對CE-SDS提出更高的檢測效率和通量需求，同時要求保持高分析靈敏度和分辨率，以優(yōu)化研發(fā)流程，縮短產(chǎn)品研發(fā)周期，加快新藥上市步伐。 

SCIEX高通量毛細管電泳BioPhase? 8800系統(tǒng)

• 采用8通道毛細管并行處理樣品，契合生物藥研發(fā)通量效率和分析靈敏度的要求。

同時，與高通量檢測相伴而行的是：如何提供同樣高通量、高效率的樣品前處理。

貝克曼庫爾特生命科學(xué)Biomek i系列自動化工作站

• 支持全自動完成CE-SDS樣品前處理，省去大量人工操作，消除潛在錯誤和誤差。

BioPhase? 8800與Biomek的聯(lián)合，帶來蛋白藥物純度高速分析的全新時代。

近期，貝克曼庫爾特生命科學(xué)與SCIEX聯(lián)合開發(fā)的Biomek與BioPhase? 8800聯(lián)用方案再次重磅升級。在之前方案測試前處理速度和96個樣本重復(fù)性的基礎(chǔ)上2（?重磅！全自動、高通量CE-SDS樣品前處理及分離分析流程來了?。?，本次升級測試針對生物藥研發(fā)CE-SDS檢測中面臨的一次實驗檢測多種不同類型樣品，包括濃度各異，樣品和試劑混合比例不同，前處理樣品緩沖類型或pH不同，需要檢測非還原或還原等復(fù)雜場景，考察方法學(xué)重復(fù)性、線性等，進一步探索自動化代替人工操作的適用性和可靠性。

圖1. Biomek i5 Span8自動化移液工作站（上），高通量毛細管電泳BioPhase? 8800系統(tǒng)（中），BioPhase CE-SDS蛋白分子量&純度分析試劑盒（下）

結(jié)果展示

01Biomek i-series同時執(zhí)行多個樣品不同前處理流程的便捷性考察

以mAb-2和mAb-3兩種抗體測試多樣品復(fù)雜前處理場景：

01  mAb-2及mAb-3初始濃度不同；

02  mAb-2分別與兩種不同pH樣品緩沖液混合； 

03  mAb-3同時做非還原和還原實驗。

整個前處理過程不同樣品取樣量不同，添加試劑類型不同，體積不同，如果人工操作非常容易取錯試劑或加錯位置導(dǎo)致失誤，造成結(jié)果異常。

使用Biomek i-series自動執(zhí)行前處理操作，根據(jù)待移取試劑所在試劑槽不同，同時或依次吸取不同來源孔、不同體積的試劑或樣品。Biomek i-series自動調(diào)整每根移液probe的移液量和間距，按照最短路徑加入BioPhase? 8800樣品盤預(yù)設(shè)位置。全實驗流程測試中，

Biomek i-series自動化工作站能便捷地完成復(fù)雜場景下的CE-SDS樣品前處理。

02Biomek i-series抗體稀釋準確性考察

對mAb-1抗體樣品進行自動化樣品稀釋準確性考察。3份稀釋后的樣品實測濃度與理論濃度接近，三個重復(fù)樣品的實測濃度重復(fù)性好，RSD值為2.53%。結(jié)果表明Biomek i-series自動化移液工作站稀釋樣品準確性高，樣品稀釋30.65倍，母液移取量僅1.2 μL仍獲得很好的重復(fù)性和準確性。

表1. Biomek i-series自動化移液工作站稀釋樣品準確性結(jié)果 (n=3)

03不同樣品不同CE-SDS前處理結(jié)果重復(fù)性考察

mAb-2和mAb-3抗體以不同CE-SDS處理方式各平行制備3份。從表2和表3結(jié)果可見，即使Biomek自動化工作站一次性執(zhí)行了多種不同的移液過程，平行制備的3份樣品遷移時間重復(fù)性RSD值為0.16%-0.47%，校準峰面積百分比重復(fù)性RSD值為0.02%-0.48%。結(jié)果表明，Biomek i-series自動化工作站平行制樣準確度高，且BioPhase 8800不同通道毛細管重復(fù)性較好。

表2. mAb-2在不同pH樣品緩沖液，非還原處理下的重復(fù)性結(jié)果 (n=3)

表3. mAb-3在還原和非還原前處理下的重復(fù)性結(jié)果 (n=3)

04線性準確度考察

抗體樣品mAb-4在Biomek i-series自動化工作站進行逐級稀釋，并與其他試劑混合制備CE-SDS-NR和CE-SDS-R樣品，處理好的樣品盤轉(zhuǎn)移至BioPhase? 8800系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)采集。從圖2非還原主峰 (NR) 和還原輕鏈 (R-LC) 、重鏈 (R-HC) 、非糖基化重鏈 (R-NGHC) 幾個峰的線性結(jié)果看，各峰在0.1-2.0 mg/mL濃度下線性結(jié)果良好，非還原和還原的R2均在0.99以上，說明當前Biomek與BioPhase 8800聯(lián)用方案線性準確度好。

圖2. mAb-4樣品CE-SDS-NR以及CE-SDS-R線性結(jié)果

Biomek i-series與BioPhase? 8800聯(lián)用方案主要優(yōu)勢

① 操作便捷，減少人為錯誤

貝克曼庫爾特生命科學(xué)Biomek i-series自動化工作站可同時進行多樣本復(fù)雜CE-SDS前處理，可適應(yīng)樣品濃度不同，試劑體積不同，試劑類型不同等場景，顯著減少前處理人工步驟。8通道移液器可自動同時吸取不同體積的試劑加入對應(yīng)樣品孔，減少人工操作的誤差和失誤。

② 穩(wěn)定性好，重復(fù)性高

• 聯(lián)用方案結(jié)果準確度高，高濃度小體積稀釋樣品測量濃度與理論濃度接近，且RSD%小于3%；

• 不同樣品不同前處理方式制備的CE-SDS樣品，每個樣品CE-SDS結(jié)果重復(fù)性好，主峰遷移時間和校正峰面積百分比的重復(fù)性均小于1%；

• 逐級稀釋制備6個不同濃度的CE-SDS-NR和CE-SDS-R樣品，線性化結(jié)果良好，非還原主峰和還原LC、HC、NGHC峰的線性曲線R2均大于0.99。

參考文獻：

1.SCIEX Tech note：Biomek i-series自動化移液工作站與BioPhase? 8800高通量毛細管電泳在大樣本量單抗CE-SDS純度分析中的應(yīng)用——同時分析不同濃度及不同前處理的樣品（MKT-33395-A）

2. SCIEX Tech note：Biomek i-series自動化移液工作站與BioPhase? 8800聯(lián)合用于單抗CE-SDS純度分析（RUO-MKT-02-15616-ZH-A）